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蛋白胨用途

螺旋藻蛋白胨用于细菌培养基的用途

时间:2021-11-23 16:50:31 点击:702次

    做医学研究或者食品生物工程的都知道,蛋白胨在细菌培养基主要作为氮源, 也可作为碳源, 是细菌培养基应加入的营养物质,是目前培养基中的主要营养物质。目前实验室主要使用日本蛋白胨培养细菌,其价格较昂贵。为了进一步寻找价格便宜的新的优质蛋白胨, 我们尝试从螺旋藻中提取蛋白, 再酶解成蛋白胨, 作细菌生长试验。


    取螺旋藻干粉 10g 调成糊状, 充分研磨;加入 DH2O 200ml, 充分搅拌, 置 LXJ-Ⅱ离心沉淀机 3800r/ min离心 25min , 再充分混匀;置 -35 ℃冰箱 4h , 取出置室温自然融解, 反复4次。 置 LXJ-Ⅱ离心沉淀机 300r/min 离心 15min。 取上清液量其体积, 并取2ml 用凯氏定氮法〔4〕测量蛋白含量;将上清液 pH 调至 5. 0 , 置 50℃水浴箱中,加入木瓜蛋白酶液 2ml, 水解40h;将水解液 pH 调至4.0 , 加热煮沸 1min,过滤, 量其体积, 并取 2ml 用凯氏定氮法测量蛋白胨含量。 按常规普通琼脂平板配制法〔5〕, 用水解液代替蛋白胨配制培养基, 制成平板( S1);将上列 8 种菌分别接种于S1 上, 37 ℃培养 18h 后观察细菌生长情况。 与分别用日本蛋白胨 ( S2), 水解酪蛋白 ( S3) 和胰蛋白胨 ( S4) 制成的普通琼脂平板作生长对照试验。


螺旋藻蛋白胨用于细菌培养基


    破壁蛋白释放量占干重的 62.3%;水解后氨基酸量占干重的 51. 5%;四种培养基细菌菌落均为光滑型。螺旋藻干粉是一种高蛋白食品 。 其蛋白含量占干重 60 % ~ 70 % , 富含16 种氨基酸 , 并且螺旋藻生长周期短 ,光能转换率高 , 价格便宜 , 易大量获得 , 故我们选择它来制作蛋白胨 。破壁的好坏是关系到蛋白产量的一个关键因素 。 我们参照顾林梯等的方法 , 并作一定的改进 , 即把研磨、 高速离心和冻融结合使用以提高破壁率 ,达到了高的蛋白产量 。 单独采用研磨和冻融的方法 , 蛋白产量较低 , 仅占干重的 21.3 %。 单独采用高速离心 , 蛋白产量也较低 。


    采用木瓜蛋白酶水解螺旋藻蛋白,主要是因为该蛋白应归类为植物蛋白 , 而木瓜蛋白酶常用于水解植物蛋白以获得较多的游离氨基酸 。从培养结果看 , 在加入用该酶水解的蛋白胨的细菌培养基中细菌生长良好。 我们曾试验用胰蛋白酶水解螺旋藻蛋白 , 但将该酶水解物加入培养基中 , 细菌生长不良。 故认为木瓜蛋白酶是水解螺旋藻蛋白较好的一种酶。


    从细菌生长试验的结果看 , 螺旋藻蛋白胨对肺炎链球菌这种营养要求较高的细菌生长作用强于三种对照蛋白胨,对金黄色葡萄球菌等几种营养要求较低的细菌与日本蛋白胨和胰蛋白相当 , 强于水解酪蛋白 。 故认为该蛋白胨能提供细菌生长所需的氮源和碳源 , 螺旋藻可解离出一种新的廉价的优质蛋白胨 。


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